Dijagnostičke pretrage u patološkom laboratoriju rade liječnici specijalisti i znanstvenici. Uzorci tkiva može uključivati krvne pretrage i biopsije tkiva. Ponekad je možda potrebno poslati uzorke tkiva u specijalistički laboratorij u većoj bolnici kako bi se obavili ti testovi.
Čekanje rezultata neke od ovih pretraga ponekad može biti razlogom odgode početka liječenja. Vrlo je važno da liječnici imaju sve informacije koje su im potrebne kako bi donijeli najbolje odluke o liječenju pacijenta.
Zašto se rade dijagnostički testovi?
Postoje brojni testovi koji se rade kako bi se potvrdila dijagnoza limfoma. Postoje liječnici specijalisti koji su prošli posebnu obuku u ovom području za tumačenje ovih testova iz krvi, limfnih čvorova i uzoraka koštane srži za prepoznavanje bolesti.
Kako znanstvenici shvaćaju sve više o limfomu, stvaraju se novi i osjetljiviji testovi koji će liječnike informirati o dijagnozi. Sve je važnije da se ti testovi provedu kako bi se razumjela vrsta i ponašanje limfoma prije nego što se donese odluka o pravom liječenju za pacijenta.
U patološkom laboratoriju uzorci tkiva proći će brojne testove za klasifikaciju stanica raka. Također gledaju njihov oblik, veličinu i kako su grupirani u uzorcima iz limfnih čvorova i koštane srži, gledajući pod mikroskopom. Provest će dodatne testove kao što su imunofenotipizacija, citogenetička analiza i/ili molekularne studije kako bi saznali više informacija koje bi pokazale kako bi se limfom mogao ponašati.
Što je imunofenotipizacija?
Imunofenotipizacija je proces koji se koristi za razlikovanje različitih vrsta stanica. Na primjer, razlika između normalnih limfocita i stanica limfoma. To čini otkrivanjem malih identifikacijskih tvari, tzv 'markeri' or 'antigeni' koji se izražavaju na stanicama.
Imunofenotipizacija daje informacije o vrstama antigeni nalaze na ili unutar bijele krvne stanice (WBC). Ovaj test može pomoći u dijagnosticiranju i identificiranju specifičnih vrsta limfoma. U nekim slučajevima, informacije mogu predvidjeti koliko je limfom agresivan ili koliko će reagirati na liječenje. Može se provesti testiranje kako bi se vidjelo koliko je liječenje bilo učinkovito i kako bi se potražila zaostala ili recidivirajuća bolest.
Imunofenotipizacija se može napraviti na dvije metode. Tu spadaju test tzv imunohistokemija (IHC) ili protočna citometrija.
Imunohistokemija (IHC)
Imunofenotipizacija može se obaviti na dva načina. Imunohistokemija (IHC), ovdje se mrlje nanose na stanice koje su na stakalcu. Zatim se gledaju pod mikroskopom. Mrlje će identificirati antigene ili markere prisutne na stanicama.
Protok citometrija
Druga metoda je protočna citometrija. U ovom testu uzorak se obrađuje i dodaju se antitijela koja su obilježena fluorescentnim markerima. ove antitijela priložiti određenim antigeni kada su prisutni. Uzorak teče kroz instrument koji se zove a protočna citometrija gdje se analiziraju pojedinačne stanice.
Protok citometrija mjeri broj i postotak stanica u uzorku krvi te karakteristike stanica poput veličine, oblika i prisutnosti biomarkera na površini stanice. Protočna citometrija također može otkriti rezidualne razine bolesti nakon liječenja. To pomaže liječniku da prepozna recidiv bolesti i po potrebi ponovno započne liječenje.
Imunohistokemija (IHC)
- Tanke kriške uzorka biopsije (ili tanki slojevi tekućine) tretiraju se setovima antitijela koja prepoznaju različite markere koji se nalaze u različitim vrstama limfoma ili leukemijskih stanica i normalnih limfocita.
- Patolog pregledava stakalce pod mikroskopom kako bi potražio vidljivu promjenu boje koja se događa kada se antitijelo zalijepi za marker
- Patolog identificira i broji broj stanica koje su označene bojom (što znači da su pozitivne na marker) sa svakim od različitih antitijela.
Protok citometrija
- Stanice iz uzorka biopsije stavljaju se u tekuću otopinu i tretiraju setovima protutijela koja prepoznaju različite antigene koji se nalaze u različitim vrstama stanica limfoma.
- Mješavina stanica-antitijela ubrizgava se u instrument koji se zove protočni citometar. Ovaj stroj koristi laserske zrake kako bi osjetio različite boje koje stanice emitiraju iz različitih antitijela vezanih za njih. Ove informacije mjeri i analizira računalo, a tumači ih patolog.
Što je citogenetička analiza?
Kromosomi sadrže gene koji se sastoje od dugih niti DNK. Zdrave ljudske stanice imaju 23 para kromosoma. Kromosomi su podijeljeni u dvije regije koje se nazivaju 'kraci', a koje se nazivaju p (kratki krak) i q (dugi krak). Neki limfomi i druge vrste raka imaju previše ili premalo kromosoma ili imaju kromosome s abnormalnom strukturom. Najčešće kromosomi su slomljeni i ponovno spojeni (translokacije), tako da su dijelovi kromosoma pogrešno povezani što dovodi do aktivacije signala rasta tumora.
In citogenetski analiza, kromosomi iz stanica raka ispituju se pod mikroskopom kako bi se provjerilo nema li premalo ili previše kromosoma. Obično su potrebna dva do tri tjedna za dobivanje rezultata citogenetskog testiranja jer se u laboratoriju mora uzgojiti dovoljan broj stanica raka da bi se dobilo dovoljno genetskog materijala za analizu.
Rezultati ovog citogenetička analiza također može pomoći u razlikovanju različiti tipovi of ne-Hodgkinov limfom ili pomoći u donošenju odluka o liječenju.
Koje su vrste kromosomskih abnormalnosti?
Jedna vrsta kromosomske abnormalnosti koja se nalazi u nekim vrstama limfoma naziva se translokacija, koji se događa kada se dio kromosoma odvoji od svoje normalne lokacije i postane pričvršćen za drugi kromosom.
Druga vrsta kromosomske abnormalnosti naziva se a brisanje, što se događa kada nedostaje dio kromosoma. Ovo se piše, na primjer, kao del(17p), uz napomenu da je došlo do brisanja u kratkom kraku kromosoma 17.
Zašto bi pacijentu mogli biti potrebni dodatni genetski testovi?
Liječnici mogu naručiti dodatne genetske testove kako bi potvrdili rezultate citogenetskih testova ili kako bi pronašli naše detaljnije podatke o vrstama oštećenja genetskih informacija stanica limfoma.
Vrste dodatnih genetskih pretraga
Fluorescentna in situ hibridizacija (FISH)
- FISH koristi fluorescentne kemikalije za specifično pričvršćivanje na određene dijelove kromosoma kako bi pokazao prisutnost translokacija i drugih velikih abnormalnosti.
- FISH istraživačima pruža način vizualizacije i mapiranja genetskog materijala u stanicama pojedinca, uključujući specifične gene ili dijelove gena. Ovo se može koristiti za razumijevanje raznih kromosomskih abnormalnosti i drugih genetskih mutacija.
- FISH se može provesti na uzorcima krvi, limfnih čvorova ili koštane srži, a rezultati testa obično su dostupni unutar nekoliko dana (brže od citogenetskog testiranja).
Lančana reakcija polimeraze (PCR)
- PCR je test koji se koristi za mjerenje specifičnih gena (tj. DNK) koji se ne mogu vidjeti pod mikroskopom.
- PCR testovi se mogu napraviti na vrlo maloj količini stanica, a obično je potrebno oko tjedan dana da se dobiju ovi rezultati.
sekvenciranje DNA
- Neke abnormalnosti u rastu tumora javljaju se zbog promjena u sekvenci specifičnog gena ili skupa gena
- Ti nalazi mogu pomoći u definiranju vrste tumora, određivanju prognoze ili utjecati na izbor liječenja.
- Pojedinačni gen može se sekvencirati ili se panel poznatih kritičnih gena može sekvencirati odjednom.
Kako će pacijent dobiti rezultate?
To su visoko specijalizirani testovi koji se rade samo u određenim laboratorijima. Hematolog će dobiti rezultate i protumačiti ih sa svim ostalim rezultatima pretraga. Ovim testovima može trebati neko vrijeme da se vrate, a neki testovi mogu potrajati nekoliko dana, a drugi tjednima.
Važno je dobiti neke od ovih informacija prije početka liječenja kako bi se osiguralo da se za pojedinog pacijenta daje pravo liječenje. Važno je da pacijenti znaju da tumačenje dijagnostičkih testova treba obaviti između liječnika i pacijenta.
Što izvješće znači?
Neki pacijenti vole pregledavati svoja pisana izvješća; pri tome je važno da pacijent pažljivo pregleda nalaze sa svojim liječnikom. To je zato što liječnik često tumači mnoge rezultate različitih pretraga kako bi postavio informiranu dijagnozu.
Ovo je primjer nekih CD markera za različite vrste ne-Hodgkinovih limfoma koje liječnici gledaju kako bi vidjeli što je dijagnoza limfoma, pogledajte tablicu u nastavku:
Napomena: Jedan od korisnih markera za dijagnozu Hodgkinovog limfoma je CD30
